L單元　工程及技術
L1 傳統(tǒng)發(fā)酵技術與發(fā)酵工程的應用
21．L1[2012•江蘇卷] 下列關于制作果酒、果醋和腐乳的敘述，合理的是(　　)
A．在果酒發(fā)酵后期擰開瓶蓋的間隔時間可延長
B．條件適宜時醋酸菌可將葡萄汁中的糖分解成醋酸
C．果酒發(fā)酵過程中發(fā)酵液密度會逐漸減小
D．將長滿毛霉的豆腐裝瓶腌制時，底層和近瓶口處需加大用鹽量
21．ABC　[解析] 本題考查生物技術中果酒、果醋和腐乳制作。果酒發(fā)酵后期因為酒精濃度的增加及發(fā)酵液中可利用成分的減少，導致酵母菌生理活動強度下降，產(chǎn)生氣體量減少，擰開瓶蓋放氣的時間可以延長，A正確。條件適宜時醋酸菌能將葡萄汁中糖氧化分解成醋酸，B正確。果酒發(fā)酵過程中有機物不斷被分解成二氧化碳和酒精，其中二氧化碳不斷被放到空氣中，導致液體中有機物減少，密度減小，C正確。將長滿毛霉的豆腐塊分層整齊地擺放在瓶中，同時逐層加鹽。越接近瓶口，雜菌污染的可能性越大，因此要隨著豆腐層的加高增加鹽的用量，在接近瓶口的表面，鹽要鋪厚一些，故D錯。

L2 微生物的類型、營養(yǎng)和代謝







L3 微生物的培養(yǎng)與應用
5．L3[2012•全國卷] 下列關于細菌的敘述，正確的是(　　)
A．不同種類細菌的生長均需要相同碳源
B．常用液體培養(yǎng)基分離獲得細菌單菌落
C．細菌大量培養(yǎng)過程中，芽孢形成于細菌生長的調整期
D．培養(yǎng)基中含有高濃度NaCl有利于金黃色葡萄球菌的篩選
5．D　[解析] 本題考查培養(yǎng)基的成分、應用和微生物的生長和篩選。碳源是指能為微生物提供生長繁殖所需碳元素的營養(yǎng)物質，不同種類的微生物對碳源的需求不同，糖類是最常用的碳源，其次還有CO2、花生粉餅等，A項錯誤；分離細菌菌落常用固體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基常用于工業(yè)化生產(chǎn)，B項錯誤；細菌培養(yǎng)過程中，產(chǎn)生芽孢是在穩(wěn)定期，C項錯誤；高濃度NaCl可抑制多種細菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，所以可以將其篩選出來，D項正確。


5．L3 [2012•北京卷] 生物學實驗中，在接種時不進行嚴格無菌操作對實驗結果影響最大的一項是(　　)
A．將少許干酵母加入到新鮮的葡萄汁中
B．將毛霉菌液接種在切成小塊的鮮豆腐上
C．將轉基因植物葉片接種到無菌培養(yǎng)基上
D．將土壤浸出液涂布在無菌的選擇培養(yǎng)基上
5．C　[解析] 本題考查微生物的培養(yǎng)及其運用，考查識記和理解。不進行嚴格滅菌對葡萄酒的制作和臭豆腐的制作影響都不大；外植體的培養(yǎng)必須在嚴格的無菌環(huán)境中進行，而且操作的各環(huán)節(jié)都要注意嚴格滅菌，可見不嚴格無菌操作對該實驗影響較大；將土壤浸出液涂布在無菌的選擇培養(yǎng)基上，目的是獲得特定微生物，所用培養(yǎng)基應該是選擇培養(yǎng)基，而選擇培養(yǎng)基只有特定的微生物才能生存，所以不嚴格無菌操作對實驗結果影響不大。綜上答案選C項。



L3 酶的應用
17．L3[2012•江蘇卷] 下列關于酶和固定化酵母細胞的研究與應用的敘述，錯誤的是(　　)
A．從酶的固定方式看，吸附法比結合法對酶活性影響小
B．作為消化酶使用時，蛋白酶制劑以口服方式給藥
C．尿糖試紙含有固定化的葡萄糖酶和過氧化氫酶，可以反復使用
D．將海藻酸鈉凝膠珠用無菌水沖洗，目的是洗去CaCl2和雜菌
17．C　[解析] 本題考查固定化酶和固定化細胞知識。固定酶的方式中，吸附法只是將酶吸附在一定的介質上，對酶的影響很小�；瘜W結合法是通過酶和化學物質發(fā)生反應而起到固定作用的，A項正確。作為消化酶使用的蛋白酶制劑要在消化道中發(fā)揮作用，所以只能以口服的方式給藥，B項正確。尿糖試紙中的酶雖可以反復利用，但試紙顯色的無色化合物會因發(fā)生反應而影響到再次使用的效果，C項錯。海藻酸鈉凝膠珠做成后要用于催化化學反應的進行，為防止雜菌感染常用無菌水將雜菌和制作凝膠珠過程用的CaCl2溶液一并沖洗掉，D項正確。

16．L3[2012•江蘇卷] 下列關于“探究加酶洗衣粉和普通洗衣粉的洗滌效果”的敘述，合理的是(　　)
A．先用熱水溶解洗衣粉，再將水溫調節(jié)到最適溫度
B．實驗的觀察指標可以是相同洗滌時間內污漬的殘留程度
C．相同pH時加酶洗衣粉洗滌效果好于普通洗衣粉
D．衣物質地和洗衣粉用量不會影響實驗結果
16．B　[解析] 本題考查酶的作用及對照實驗設計知識。酶遇高溫會變性或失活，再遇最適溫度也不能恢復其原有活性，此種處理會人為降低加酶洗衣粉的洗滌效果，故A項錯誤。檢測兩種洗衣粉洗滌效果的因變量可以是相同條件下污漬的殘留程度，故B項正確。酶發(fā)揮作用與pH相關，在酶能發(fā)揮作用的pH范圍內，加酶洗衣粉的洗滌效果要好于普通的洗衣粉；在pH過高或過低時，可能兩種洗衣粉的洗滌效果是相同的，故C錯。在探究實驗進行時，除洗衣粉的種類不同之外，其余條件應完全相同。比如衣物質地和用量都應保證完全相同，因為這些因素也會影響實驗的結果。

L4 DNA的粗提取及蛋白質提取技術
18．L4[2012•江蘇卷] 下列關于“DNA粗提取與鑒定實驗”的敘述，正確的是(　　)
A．洗滌劑能瓦解細胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度
B．將DNA絲狀物放入二苯胺試劑中沸水浴后冷卻變藍
C．常溫下菜花勻漿中有些酶類會影響DNA的提取
D．用玻棒緩慢攪拌濾液會導致DNA獲得量減少
18．C　[解析] 本題考查“DNA粗提取與鑒定實驗”中洗滌劑作用、二苯胺鑒定等知識。在選用植物材料進行實驗時常常用洗滌劑用于溶解植物細胞的細胞膜，但洗滌劑不能改變DNA在NaCl溶液中的溶解度，故A項錯。在進行DNA鑒定時中應先將DNA絲狀物加入2 mol/L的NaCl溶液中溶解，再向試管中加入二苯胺試劑，而不是直接加入二苯胺溶液中，故B項錯。菜花制作的勻漿中含有多種酶，與DNA有關的酶能影響到DNA的粗提取，C項正確。在實驗過程中用玻璃棒緩慢攪拌濾液的目的是以免加劇DNA分子的斷裂，導致DNA分子不能形成絮狀沉淀，并不會導致DNA含量的減少，D項錯誤。

L5 植物有效成分的提取
34．L5L7[2012•山東卷] [生物—生物技術實踐]
辣椒素作為一種生物堿廣泛用于食品保健、醫(yī)藥工業(yè)等領域。辣椒素的獲得途徑如圖所示。

(1)圖中①和②分別表示辣椒組織培養(yǎng)中細胞的________和________過程。
(2)圖中培養(yǎng)外植體的培養(yǎng)基中常用的凝固劑是__________。培養(yǎng)基中的生長素和細胞分裂素用量的比值________(填“高”或“低”)時，有利于芽的分化。對培養(yǎng)基徹底滅菌時，應采取的滅菌是________________________________________________________________________。
(3)圖中外植體的消毒所需酒精的體積分數(shù)是__________。用酶解法將愈傷組織分離成單細胞時，常用的酶是________和纖維素酶。
(4)提取辣椒素過程中，萃取加熱時需安裝冷凝回流裝置，其目的是______________。
34．(1)脫分化(或去分化)　再分化
(2)瓊脂　低　高壓蒸汽滅菌法
(3)70%　果膠酶　防止有機溶劑揮發(fā)
[解析] 本題主要考查植物組織培養(yǎng)的過程和植物成分的提取中的注意事項。由外植體得到愈傷組織的過程是脫分化過程，由愈傷組織得到根、芽的過程是再分化過程；培養(yǎng)基中的植物激素能夠促進植物的生長和發(fā)育，當生長素/細胞分裂素的比值低時有利于芽的分化，當比值高時有利于根的分化；對培養(yǎng)基進行徹底滅菌常用高壓蒸汽滅菌法；外植體的消毒所需酒精的體積分數(shù)是70%; 細胞間的主要成分纖維素和果膠，分離細胞要用到纖維素酶和果膠酶；用冷凝回流裝置可以防止有機溶劑隨蒸汽揮發(fā)。

L6 基因工程與蛋白質工程
6．L6[2012•浙江卷] 天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于缺少控制藍色色素合成的基因B，而開藍色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B。現(xiàn)用基因工程技術培育藍玫瑰，下列操作正確的是(　　)
A．提取矮牽牛藍色花的mRNA，經(jīng)逆轉錄獲得互補的DNA，再擴增基因B
B．利用限制性核酸內切酶從開藍色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因B
C．利用DNA聚合酶將基因B與質粒連接后導入玫瑰細胞
D．將基因B直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入玫瑰細胞
6．A　[解析] 本題考查基因工程的內容，考查對該內容的理解和應用能力。本題題干中說明矮牽�；ㄖ写嬖谛蛄幸阎�的基因B，我們可以用化學方法合成目的基因，或者用逆轉錄法來獲取目的基因，A對。當目的基因序列未知時，可以采用基因文庫法獲取目的基因。而且限制性核酸內切酶是在建立基因文庫時使用，不是提取基因時使用，B錯。應該利用DNA連接酶將基因B與質粒連接后導入，C錯。受體細胞是植物細胞時，可以利用農(nóng)桿菌轉化法來導入目的基因，而不是大腸桿菌，D錯。

8．L6C11[2012•天津卷] 黃曲霉毒素B1(AFB1)存在于被黃曲霉菌污染的飼料中，它可以通過食物鏈進入動物體內并蓄積，引起癌變。某些微生物能表達AFB1解毒酶，將該酶添加在飼料中可以降解AFB1，消除其毒性。
回答下列問題：
(1)AFB1屬于________類致癌因子。
(2)AFB1能結合在DNA的G上，使該位點受損傷變?yōu)镚′，在DNA復制中，G′會與A配對。現(xiàn)有受損傷部位的序列為—AG′T——TCA—，經(jīng)兩次復制后，該序列突變?yōu)開_______。
(3)下圖為采用基因工程技術生產(chǎn)AFB1解毒酶的流程圖。
含AFB1解毒酶基因的菌株??→Ⅰ總RNA?→cDNA??→ⅡPCRAFB1解毒酶基因??→構建酵母工程菌??→表達純化AFB1解毒酶
　 據(jù)圖回答問題：
①在甲、乙條件下培養(yǎng)含AFB1解毒酶基因的菌株，經(jīng)測定，甲菌液細胞密度小、細胞含解毒酶；乙菌液細胞密度大、細胞不含解毒酶。過程Ⅰ應選擇________菌液的細胞提取總RNA，理由是________________________________________________________________________。
②過程Ⅱ中，與引物結合的模板是________________________________________________________________________。
③檢測酵母工程菌是否合成了AFB1解毒酶，應采用________方法。
(4)選取不含AFB1的飼料和某種實驗動物為材料，探究該AFB1解毒酶在飼料中的解毒效果。實驗設計及測定結果見下表。

組
別
添加
AFB1(μg/kg飼料) AFB1解毒酶(g/kg飼料) 肝臟AFB1殘
留量(ng/g)
A 0 0 6.4
B 100 0 20.9
C 100 1 16.8
D 100 3 11.7
E 100 5 7.3
F 100 7 7.3
據(jù)表回答問題：
①本實驗的兩個自變量分別為________________________________________________________________________。
②本實驗中，反映AFB1解毒酶解毒效果的對照組是______________。
③經(jīng)測定，某污染飼料中AFB1含量為100 μg/kg，則每千克飼料應添加______________克AFB1解毒酶，解毒效果最好，同時節(jié)約了成本。
(5)采用蛋白質工程進一步改造該酶的基本途徑是：從提高酶的活性出發(fā)，設計預期的蛋白質結構，推測應有的氨基酸序列，找到相對應的______________序列。
8．(1)化學
(2)—ATT——TAA—
(3)①甲　甲菌液細胞的AFB1解毒酶基因已轉錄生成mRNA，而在乙菌液細胞中該基因未轉錄
②AFB1解毒酶基因的cDNA
③抗原—抗體雜交
(4)①AFB1的添加量和AFB1解毒酶的添加量
②B組(或B組＋A組)
③5
(5)脫氧核苷酸
[解析] 本題考查基因工程與蛋白質工程的相關內容，考查學生的識圖能力和綜合分析能力。
(1)黃曲霉毒素B1(AFB1)是一種化學物質，屬于化學類致癌因子。
(2)根據(jù)題中信息可知G′會與A配對，所以受損傷部位的序列經(jīng)一次復制后，變?yōu)?mdash;TAA——AG′T—和—AGT&mdash,高三;—TCA—序列，再經(jīng)一次復制后變?yōu)?mdash;ATT——TAA—、—TAA——AG′T—、—TCA——AGT—和—AGT——TCA—序列，該序列經(jīng)兩次復制后突變?yōu)?mdash;ATT——TAA—。
(3)①過程Ⅰ應選擇甲菌液的細胞提取總RNA ，理由是甲菌液細胞中含AFB1解毒酶，意味著完成了基因的表達，轉錄出了mRNA ，而乙菌液細胞中不含AFB1解毒酶，未發(fā)生轉錄，所以應選擇甲菌液的細胞提取總RNA；②過程Ⅱ中，根據(jù)圖示可以看出與引物結合的模板是cDNA；③檢測基因是否表達應采用抗原－抗體雜交方法。
(4)①由表中信息可知AFB1的有無和AFB1解毒酶的含量是本實驗的兩個自變量。②本實驗中，A組是無添加AFB1、無添加AFB1解毒酶的對照組，B組是無添加AFB1解毒酶的對照組。C～F組與B組(或B組＋A組)對照能反應AFB1解毒酶的解毒效果。③從表中信息可以得出，某污染飼料中AFB1含量為100 μg/kg 時，每千克飼料應添加5克AFB1解毒酶，解毒效果最好，同時節(jié)約成本。
(5)蛋白質工程的基本途徑是：從預期的蛋白質功能出發(fā)→設計預期的蛋白質結構→推測應有的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列(基因)。

40．L6[2012•課標全國卷] [生物—選修3現(xiàn)代生物科技專題]
根據(jù)基因工程的有關知識，回答下列問題：
(1)限制性內切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有________和________。
(2)質粒運載體用EcoR Ⅰ切割后產(chǎn)生的片段如下：
　　　　　AATTC……G
　　　　　　　　G……CTTAA
為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoR Ⅰ切割外，還可用另一種限制性內切酶切割，該酶必須具有的特點是________________________________________________________________________。
(3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即________DNA連接酶和________DNA連接酶。
(4)反轉錄作用的模板是________，產(chǎn)物是________。若要在體外獲得大量反轉錄產(chǎn)物，常采用________技術。
(5)基因工程中除質粒外，________和________也可作為運載體。
(6)若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是______________________________________________。
40．(1)黏性末端　平末端
(2)切割產(chǎn)生的DN *** 段末端與EcoR Ⅰ切割產(chǎn)生的相同
(3)大腸桿菌　 T4
(4)mRNA(或RNA)　cDNA(或DNA)　 PCR
(5)噬菌體　動植物病毒
(6)未處理的大腸桿菌吸收質粒(外源DNA)的能力極弱
[解析] 本題考查基因工程技術，考查學生的理解能力。(1)當限制酶在它識別序列的中心軸線兩側將DNA的兩條鏈分別切開時，產(chǎn)生的是黏性末端，而當限制酶在它識別序列的中心軸線處切開時，產(chǎn)生的則是平末端。(2)為使運載體與目的基因相連，不同的限制酶應切割出相同的黏性末端，它們必須要能識別相同的核苷酸序列。(3)根據(jù)酶的來源不同，DNA連接酶可以分為兩類：一類是從大腸桿菌中分離得到的，稱為大腸桿菌E•coli DNA連接酶；另一類是從T4噬菌體中分離出來的，稱為T4 DNA連接酶。(4)反轉錄是以mRNA(或RNA)為模板合成cDNA(或DNA)的過程�？梢栽隗w外短時間內大量擴增DNA的技術叫PCR(多聚酶鏈式反應)技術。(5)基因工程中除質粒外，還有λ噬菌體的衍生物、動植物病毒等可作為運載體。(6)大腸桿菌細胞外有細胞壁，能阻止其他物質的進入，只能通過Ca2＋處理細胞，使細胞處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)才能使重組質粒進入細胞，未處理的大腸桿菌吸收重組質粒的能力極弱。

32．L6[2012•江蘇卷] 圖11表示含有目的基因D 的DNA 片段長度(bp 即堿基對)和部分堿基序列，圖12表示一種質粒的結構和部分堿基序列�，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4 種限制性核酸內切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題：

圖11　　　　　　　　　　　圖12
(1)圖11的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由__________________連接。
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖11中DN *** 段，產(chǎn)生的末端是________末端，其產(chǎn)物長度為________。
(3)若圖11中虛線方框內的堿基對被T－A 堿基對替換，那么基因D 就突變?yōu)榛�因d。從雜合子中分離出圖11及其對應的DNA 片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，產(chǎn)物中共有________種不同長度的DNA 片段。
(4)若將圖12中質粒和目的基因D 通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是________。在導入重組質粒后，為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌， 一般需要用添加________的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
32．(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖
(2)平　537 bp、790 bp、661 bp
(3)4
(4)BamHⅠ　抗生素B　同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質粒反向連接
[解析] 本題考查基因工程，考查學生分析及理解能力。(1)據(jù)DNA分子的結構可知，在一條鏈中相鄰兩個堿基之間的連接為：堿基－脫氧核糖－磷酸－脫氧核糖－堿基。(2)圖11 DNA分子中，限制酶SmaⅠ的切割位點有2個，可將該DNA切割為3個片段，據(jù)圖中切割位置可數(shù)出，3個片段的長度依次為537 bp、790 bp、661 bp。(3)基因D突變?yōu)榛�因d后，只有1個限制酶SmaⅠ的切割位點，基因d被切割為1 327 bp和661 bp 2種片段；雜合子中還有基因D，可被切割為3種片段，因此產(chǎn)物中共4種片段。(4)目的基因的插入位點應在一個標記基因內，若選用限制酶MboⅠ，則兩個標記基因都會被切開，因此只能選擇限制酶BamHⅠ，因此應加入抗生素B進行篩選。含目的基因的DN *** 段和運載體用同種限制酶切割，可能會發(fā)生反向連接，使部分菌株中基因D不能表達。

32．L6、L8[2012•福建卷] [生物—現(xiàn)代生物科技專題]
肺細胞中的let­7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術將let­7基因導入肺癌細胞實現(xiàn)表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖1。
圖1


圖2


請回答：
(1)進行過程①時，需用____________酶切開載體以插入let­7基因。載體應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動let­7基因轉錄，該部位稱為________。
(2)進行過程②時，需用______酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細胞，以利于傳代培養(yǎng)。
(3)研究發(fā)現(xiàn)，let­7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖2。據(jù)圖分析，可從細胞中提取______進行分子雜交，以直接檢測let­7基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中______(RAS mRNA/RAS蛋白)含量減少引起的。
32．(1)限制性核酸內切(或限制)　啟動子
(2)胰蛋白　(3)RNA　RAS蛋白
[解析] 本題主要考查有關基因工程和細胞工程中的知識。(1)過程①表示基因表達載體的構建，在該過程中需要用限制酶對載體進行切割以便于目的基因的插入；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶結合和識別的位點，RNA聚合酶結合到該位點，可驅動轉錄過程。(2)過程②表示動物細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸性抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個的細胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進行傳代培養(yǎng)。(3)判斷目的基因是否在受體細胞中轉錄，可用分子雜交技術來進行檢測，從細胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標記的目的基因單鏈DN *** 段進行雜交。根據(jù)題中信息“肺組織細胞中的let­7基因表達減弱，癌基因RAS表達就增強，引發(fā)肺癌”，導入let­7基因后，肺癌細胞受到抑制，說明RAS基因表達減弱，導致細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞受抑制。

31．G3、L6 [2012•安徽卷] 甲型血友病是由X染色體上的隱性基因導致的遺傳病(H對h為顯性)。圖4中兩個家系都有血友病發(fā)病史，Ⅲ2和Ⅲ3婚后生下一個性染色體組成是XXY的非血友病兒子(Ⅳ2)，家系中的其他成員性染色體組成均正常。

圖4
(1)根據(jù)圖4，________(填“能”或“不能”)確定Ⅳ2兩條X染色體的來源；Ⅲ4與正常女子結婚，推斷其女兒患血友病的概率是________。
(2)兩個家系的甲型血友病均由凝血因子Ⅷ(簡稱F8，即抗血友病球蛋白)基因堿基對缺失所致。為探明Ⅳ2的病因，對家系的第Ⅲ、Ⅳ代成員F8基因的特異片段進行了PCR擴增，其產(chǎn)物電泳結果如圖5所示，結合圖4，推斷Ⅲ3的基因型是________。請用圖解和必要的文字說明Ⅳ2非血友病XXY的形成原因。

圖5







(3)現(xiàn)Ⅲ3再次懷孕，產(chǎn)前診斷顯示胎兒(Ⅳ3)細胞的染色體為46，XY；F8基因的PCR檢測結果如圖5所示。由此建議Ⅲ3________。
(4)補給F8可治療甲型血友病。采用凝膠色譜法從血液中分離純化F8時，在凝膠裝填色譜柱后，需要用緩沖液處理較長時間，其目的是________；若F8比某些雜蛋白先收集到，說明F8的相對分子質量較這些雜蛋白________。
(5)利用轉基因豬乳腺生物反應器可生產(chǎn)F8。要使乳腺細胞合成F8，構建表達載體時，必須將F8基因cDNA與豬乳腺蛋白基因的________等調控組件重組在一起。F8基因cDNA可通過克隆篩選獲得，該cDNA比染色體上的F8基因短，原因是該cDNA沒有________。
(6)為獲得更多的轉基因母豬，可以采用體細胞克隆技術，將純合轉基因母豬的體細胞核注入____________，構建重組胚胎進行繁殖。
31．(1)不能　0
(2)XHXh　圖解如下

在Ⅲ3形成卵細胞過程中的減數(shù)第二次分裂后期，帶有基因H的姐妹染色單體移向細胞同一極，形成XHXH卵細胞。XHXH卵細胞與正常精子結合形成XHXHY受精卵。
(3)終止妊娠
(4)洗滌平衡凝膠，并使凝膠裝填緊密　大
(5)啟動子　內含子
(6)去核的卵母細胞
[解析] 本題考查人類遺傳病、減數(shù)分裂、蛋白質的提取等相關知識，考查學生的分析與綜合能力。(1)Ⅳ2的性染色體組成是XXY，這兩條X染色體，有可能是精子形成過程中同源染色體沒有分開，形成了一個含有
XY染色體的配子，也可能是減數(shù)第一次分裂后期同源染色體未分離，也可能是減數(shù)第二次分裂后期染色單體分開后未移向兩極，形成了含有兩條X染色體的配子，故無法判斷兩條X染色體的來源。Ⅲ4的基因型是XHY，肯定將XH傳給女兒，女兒不可能患血友病。(2)Ⅲ2是血友病患者，含有Xh，圖中位于下部的條帶均應含有Xh基因，上面的條帶應含XH基因，則Ⅲ3的基因型是XHXh，Ⅳ2是非血友病患者，且從條帶的位置可以看出其基因型是XHXHY，故不可能在減數(shù)第一次分裂時出現(xiàn)異常產(chǎn)生含有XHXh的配子，精子的形成過程正常，圖解如答案所示。(3)Ⅲ3再次懷孕的孩子是男孩，從條帶結果看含有基因Xh，為血友病患者，應當終止妊娠。(4)凝膠裝填色譜柱后用緩沖液處理較長時間，目的是洗滌平衡凝膠，并使凝膠裝填緊密。(5)表達載體上的調控組件包括啟動子和終止子，基因必須含有啟動子才能開始復制。真核細胞基因的編碼區(qū)含有外顯子和內含子，轉錄出成熟的mRNA時經(jīng)過了剪切，mRNA上不含有內含子，cDNA是mRNA通過反轉錄得到的，也就不含內含子。(6)動物細胞核移植的受體細胞是去核的卵母細胞。

L7 植物細胞工程與植物的組織培養(yǎng)技術
34．L5L7[2012•山東卷] [生物—生物技術實踐]
辣椒素作為一種生物堿廣泛用于食品保健、醫(yī)藥工業(yè)等領域。辣椒素的獲得途徑如圖所示。

(1)圖中①和②分別表示辣椒組織培養(yǎng)中細胞的________和________過程。
(2)圖中培養(yǎng)外植體的培養(yǎng)基中常用的凝固劑是__________。培養(yǎng)基中的生長素和細胞分裂素用量的比值________(填“高”或“低”)時，有利于芽的分化。對培養(yǎng)基徹底滅菌時，應采取的滅菌方法是________________________________________________________________________。
(3)圖中外植體的消毒所需酒精的體積分數(shù)是__________。用酶解法將愈傷組織分離成單細胞時，常用的酶是________和纖維素酶。
(4)提取辣椒素過程中，萃取加熱時需安裝冷凝回流裝置，其目的是______________。
34．(1)脫分化(或去分化)　再分化
(2)瓊脂　低　高壓蒸汽滅菌法
(3)70%　果膠酶　防止有機溶劑揮發(fā)
[解析] 本題主要考查植物組織培養(yǎng)的過程和植物成分的提取中的注意事項。由外植體得到愈傷組織的過程是脫分化過程，由愈傷組織得到根、芽的過程是再分化過程；培養(yǎng)基中的植物激素能夠促進植物的生長和發(fā)育，當生長素/細胞分裂素的比值低時有利于芽的分化，當比值高時有利于根的分化；對培養(yǎng)基進行徹底滅菌常用高壓蒸汽滅菌法；外植體的消毒所需酒精的體積分數(shù)是70%; 細胞間的主要成分纖維素和果膠，分離細胞要用到纖維素酶和果膠酶；用冷凝回流裝置可以防止有機溶劑隨蒸汽揮發(fā)。

39．L7[2012•課標全國卷] [生物—選修1生物技術實踐]
為了探究6—BA和IAA對某菊花品種莖尖外植體再生叢芽的影響，某研究小組在MS培養(yǎng)基中加入6—BA和IAA，配制成四種培養(yǎng)基(見下表)，滅菌后分別接種數(shù)量相同、生長狀態(tài)一致、消毒后的莖尖外植體，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，統(tǒng)計再生叢芽外植體的比率(m)，以及再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)，結果如下表。


培養(yǎng)基編號
1
2
3
4
濃度/mg•L－1
6—BA IAA
0.5
0
0.1
0.2
0.5
m/% n/個
76.7 3.1
77.4 6.1
66.7 5.3
60.0 5.0
回答下列問題：
(1)按照植物的需求量，培養(yǎng)基中無機鹽的元素可分為________和________兩類。上述培養(yǎng)基中，6—BA屬于________類生長調節(jié)劑。
(2)在該實驗中，自變量是________，因變量是______________________________________，自變量的取值范圍是________。
(3)從實驗結果可知，誘導叢芽總數(shù)最少的培養(yǎng)基是________號培養(yǎng)基。
(4)為了誘導該菊花試管苗生根，培養(yǎng)基中一般不加入________(填“6—BA”或“IAA”)。
39．(1)大量元素　微量元素　細胞分裂素
(2) IAA的濃度　再生叢芽外植體的比率(m)和再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)　0～0.5 mg•L－1　(3)1　(4)6－BA
[解析] 本題考查IAA和 6－BA對植物組織培養(yǎng)的影響，考查學生的理解能力。(1)根據(jù)植物的需求量，元素可以分為大量元素和微量元素，6－BA屬于細胞分裂素類的生長調節(jié)劑。(2)根據(jù)實驗目的和實驗中的步驟中的數(shù)據(jù)可知，6－BA濃度不變，IAA濃度范圍是0～0.5 mg•L－1，由小到大變化是自變量。根據(jù)題干信息可知再生叢芽外植體的比率(m)和再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)是因變量。(3)再生叢芽外植體的比率(m)乘以再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)即為叢芽總數(shù)，所以最少的是1號培養(yǎng)基。(4)誘導試管苗生根需要生長素用量和細胞分裂素用量的比值比較高，所以培養(yǎng)基中不需要加6－BA。

2．L7 [2012•廣東卷] 培育草莓脫毒苗所采用的主要技術是(　　)
A．組織培養(yǎng)　　　　　　　B．細胞雜交
C．顯微注射 D．核移植
2．A　[解析] 草莓是無性繁殖的作物，它感染的病毒很容易傳播給后代，病毒在作物體內逐年積累，就會導致作物產(chǎn)量降低，品質變差。而植株分生區(qū)附近(如莖尖)的細胞含病毒極少，甚至無病毒，因此可以利用植物組織培養(yǎng)技術培養(yǎng)出脫毒幼苗。植物體細胞雜交就是將不同的植物體細胞在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成新植物體的技術。動物細胞融合也稱細胞雜交。顯微注射是將含有目的基因的表達載體導入動物細胞的方法。核移植是培養(yǎng)克隆動物的方法。故選A。

L8 動物細胞工程與單克隆抗體
32．L6、L8[2012•福建卷] [生物—現(xiàn)代生物科技專題]
肺細胞中的let­7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術將let­7基因導入肺癌細胞實現(xiàn)表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖1。
圖1


圖2


請回答：
(1)進行過程①時，需用____________酶切開載體以插入let­7基因。載體應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動let­7基因轉錄，該部位稱為________。
(2)進行過程②時，需用______酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細胞，以利于傳代培養(yǎng)。
(3)研究發(fā)現(xiàn)，let­7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖2。據(jù)圖分析，可從細胞中提取______進行分子雜交，以直接檢測let­7基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中______(RAS mRNA/RAS蛋白)含量減少引起的。
32．(1)限制性核酸內切(或限制)　啟動子
(2)胰蛋白　(3)RNA　RAS蛋白
[解析] 本題主要考查有關基因工程和細胞工程中的知識。(1)過程①表示基因表達載體的構建，在該過程中需要用限制酶對載體進行切割以便于目的基因的插入；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶結合和識別的位點，RNA聚合酶結合到該位點，可驅動轉錄過程。(2)過程②表示動物細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸性抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個的細胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進行傳代培養(yǎng)。(3)判斷目的基因是否在受體細胞中轉錄，可用分子雜交技術來進行檢測，從細胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標記的目的基因單鏈DN *** 段進行雜交。根據(jù)題中信息“肺組織細胞中的let­7基因表達減弱，癌基因RAS表達就增強，引發(fā)肺癌”，導入let­7基因后，肺癌細胞受到抑制，說明RAS基因表達減弱，導致細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞受抑制。

L9 胚胎工程
2．L9[2012•浙江卷] 下列關于高等哺乳動物受精與胚胎發(fā)育的敘述，正確的是(　　)
A．絕大多數(shù)精卵細胞的識別具有物種特異性
B．卵裂球細胞的體積隨分裂次數(shù)增加而不斷增大
C．囊胚的滋養(yǎng)層細胞具有發(fā)育全能性
D．原腸胚發(fā)育分化形成內外兩個胚層
2．A　[解析] 本題考查胚胎工程的內容，考查學生對該內容的識記并理解應用能力。同種動物精卵細胞表面有相互識別的特異性蛋白，所以能進行特異性識別。卵裂球尚未著床，不能從母體獲得營養(yǎng)物質，所以細胞的體積會隨分裂次數(shù)增加而不斷減小。囊胚外表有一層扁平細胞，稱為滋養(yǎng)層，將發(fā)育成胎盤等附屬結構，囊胚內部的內細胞團細胞具有發(fā)育全能性。原腸胚發(fā)育分化形成內中外三個胚層。

1．D2L9[2012•天津卷] 下列有關干細胞的敘述，錯誤的是(　　)
A．自體干細胞移植通常不會引起免疫排斥反應
B．胚胎干細胞在體外培養(yǎng)能增殖但不能被誘導分化
C．組織的細胞更新包括細胞凋亡和干細胞增殖分化等過程
D．造血干細胞具有分化出多種血細胞的能力，可用于治療白血病
1．B　[解析] 本題考查干細胞的相關內容，考查學生的識記、理解能力。干細胞是指動物和人體內仍保留著少數(shù)具有分裂和分化能力的細胞，它們能夠通過增殖和分化產(chǎn)生各種功能的細胞，補充到相應細胞凋亡的動物體中， C正確；干細胞也可用于自體移植，不會發(fā)生免疫排斥反應，A正確；造血干細胞可分化為紅細胞、白細胞和血小板，可用于治療白血病，D正確；胚胎干細胞在體外培養(yǎng)能增殖，并能被誘導分化形成新的組織細胞，B項錯誤。

9．L9[2012•江蘇卷] 通過胚胎移植技術，可以實現(xiàn)良種牛的快速繁殖。下列相關敘述正確的是(　　)
A．對供體和受體母牛都要進行相同激素處理
B．受精和胚胎的早期培養(yǎng)都需要在體外進行
C．對沖卵獲得的原腸胚檢查合格后方可移植
D．胚胎分割移植實現(xiàn)同卵多胎的率較低
9．D　[解析] 胚胎移植中對供、受體母牛的同期發(fā)情處理是用同種激素，但還需單獨對供體母牛注射促性腺激素，達到超數(shù)排卵的目的。胚胎移植中用的胚胎可能是在體外受精獲得的，也可能是在體內受精獲得的。從供體母牛體內沖出的胚胎如果處在可以移植的時期，則不必在體外另行培養(yǎng)了。沖卵獲得的胚胎應該在桑椹胚或囊胚階段。就現(xiàn)有水平來講，二分胚胎成活的幾率較大，多分胚胎成功的可能性較小，可能與所分割胚胎中細胞質的不斷減少有關。

L10 生物技術的安全性和倫理問題
13．L10[2012•江蘇卷] 下列關于轉基因生物安全性的敘述，錯誤的是(　　)
A．種植轉基因作物應與傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)種植區(qū)隔離
B．轉基因作物被動物食用后，目的基因會轉入動物體細胞中
C．種植轉基因植物有可能因基因擴散而影響野生植物的遺傳多樣性
D．轉基因植物的目的基因可能轉入根際微生物
13．B　[解析] 本題考查生物技術的安全性和倫理問題。種植轉基因作物時，為了防止發(fā)生基因污染應與傳統(tǒng)作物隔離種植。轉基因作物被動物食用后，目的基因在動物的消化道中被分解成小分子的有機物，所以進入動物細胞的不是目的基因而是目的基因的消化產(chǎn)物，故B錯。C項中轉基因植物中目的基因可能隨花粉傳播到同種的野生植物中，從而影響到野生植物基因的多樣性。轉基因植物的目的基因可能因為微生物的侵染進入微生物中。

6．L10[2012•江蘇卷] 下列關于人類基因組計劃的敘述，合理的是(　　)
A．該計劃的實施將有助于人類對自身疾病的診治和預防
B．該計劃是人類從細胞水平研究自身遺傳物質的系統(tǒng)工程
C．該計劃的目的是測定人類一個染色體組中全部DNA 序列
D．該計劃的實施不可能產(chǎn)生種族歧視、侵犯個人隱私等負面影響
6．A　[解析] 人類基因組計劃的研究將發(fā)現(xiàn)一些特殊的“患病基因”，能幫助人類對自身所患疾病的診治，還能幫助人們預防可能發(fā)生的與基因有關的疾病。人類基因組計劃是在基因水平上研究而不是在細胞水平。該計劃要測定的不僅是一個染色體組的基因序列，應該包含22條常染色體和X、Y兩條性染色體，共24條染色體上的DNA序列。人類基因組計劃可能帶來種族歧視和侵犯個人隱私等負面影響，由該計劃延伸來的基因身份證就是明顯的例子。

L11 生態(tài)工程





L12 生物工程及技術綜合
35．L12[2012•山東卷] [生物—現(xiàn)代生物科技專題]
毛角蛋白Ⅱ型中間絲(KIF Ⅱ)基因與絨山羊的羊絨質量密切相關。獲得轉KIF Ⅱ基因的高絨質絨山羊的簡單流程如圖所示。

(1)過程①中最常用的運載工具是__________，所需要的酶是限制酶和____________。

(2)在過程②中，用________處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。在培養(yǎng)過程中，將成纖維細胞置于5%CO2的氣體環(huán)境中，CO2的作用是________________________________________________________________________。
(3)在過程③中，用________處理以獲取更多的卵(母)細胞。成熟卵(母)細胞在核移植前需要進行________處理。
(4)從重組細胞到早期胚胎過程中所用的胚胎工程技術是__________。在胚胎移植前，通過________技術可獲得較多胚胎。
35. (1)質�！� DNA連接酶
(2)胰蛋白酶(或膠原蛋白酶)　維持培養(yǎng)基(液)pH
(3)促性腺激素(或促濾泡素、孕馬血清)　去核
(4)(早期)胚胎培養(yǎng)　胚胎分割
[解析] 本題主要考查基因工程及胚胎工程的有關知識，意在考查學生對知識的識記、理解能力。(1)圖中過程①為重組載體的構建過程，最常用的運載工具為質粒，所需要的工具酶有限制性內切酶和DNA連接酶。(2)過程②為動物細胞培養(yǎng)過程，首先用胰蛋白酶處理將皮膚組織塊分散成單個細胞，培養(yǎng)液中需通入一定的CO2，主要作用是維持培養(yǎng)液的pH值。(3)過程③常采用注射促性腺激素的方法，以便從母羊中獲得更多的卵母細胞，成熟的卵母細胞在核移植前需要進行去核處理。(4)重組細胞到早期胚胎過程所運用的胚胎工程技術是動物細胞培養(yǎng)技術或早期胚胎培養(yǎng)技術，為獲得更多的胚胎常采用胚胎分割移植技術。

22．L12[2012•江蘇卷] 下列事實能體現(xiàn)細胞全能性的是(　　)
A．棉花根尖細胞經(jīng)誘導形成幼苗
B．單細胞的DNA在體外大量擴增
C．動物雜交瘤細胞產(chǎn)生單克隆抗體
D．小鼠體細胞經(jīng)誘導培育成小鼠
22．AD　[解析] 本題是對生物技術知識的綜合考查。細胞全能性指已經(jīng)分化的細胞，仍然具有發(fā)育成完整個體的潛能。棉花的根尖細胞經(jīng)誘導后長成幼苗能體現(xiàn)細胞的全能性，故A正確。DNA在體外大量擴增通過PCR技術實現(xiàn)的，與細胞全能性無關，故B錯。動物雜交瘤細胞能產(chǎn)生單克隆抗體是動物細胞融合的一項重要應用，與細胞全能性無關，故C錯。小鼠體細胞經(jīng)誘導能長成小鼠，體現(xiàn)了細胞的全能性，故D正確。









1．[2012•平頂山一調]克隆羊的成功轟動世界，它不僅奠定了克隆性治療疾病的基礎，又解決了器官移植中供體不足的問題，同時也給人類帶來了一些過去尚未遇到的問題。如圖為人類對克隆羊技術的拓展和應用，請據(jù)圖回答下列問題：


(1)圖中所涉及的現(xiàn)代生物技術有________________和________________等。
(2)胚胎植入代孕母體成功的生理學基礎之一是受體對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生______________________________。
(3)圖中兩個克隆動物長大后，各方面特征與原型動物相同，這說明高度分化的動物________________具有全能性。
(4)圖中從“內細胞團到胚胎干細胞”的培養(yǎng)過程中，一般用________________處理內細胞團，使之分散成單個細胞。
(5)使用培養(yǎng)基進行胚胎干細胞培養(yǎng)時，通常要加入________________等天然成分，除了保證被培養(yǎng)細胞處于無菌、無毒及充足氧氣的環(huán)境中，還需要保證細胞生活所需的________________。
1．(1)核移植　胚胎移植　動物細胞培養(yǎng)(任答兩個即可)
(2)免疫排斥反應
(3)體細胞核
(4)胰蛋白酶
(5)血清　營養(yǎng)、溫度和pH
[解析] (1)圖中所涉及的現(xiàn)代生物技術有核移植、胚胎移植、動物細胞培養(yǎng)等。(2)胚胎移植的生理學基礎是：①供體和受體相同的生理環(huán)境；②早期胚胎處于游離狀態(tài)，為胚胎的收集提供了可能；③受體對移入子宮的胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥；④胚胎與受體建立正常的聯(lián)系，但遺傳物質沒有改變。 (3)早期胚胎發(fā)育經(jīng)有絲分裂為32個左右時稱為桑椹胚，在此之前的細胞均尚未進行分化，都是全能細胞。(4)動物細胞培養(yǎng)過程常用胰蛋白酶處理組織，以使之分散成單個細胞。(5)胚胎干細胞培養(yǎng)通常需加入血清、血漿等天然成分。體外培養(yǎng)細胞時需要提供充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境。
2．[2012•襄陽調研]南京古泉生態(tài)農(nóng)場是生態(tài)農(nóng)業(yè)的典范。該農(nóng)場將養(yǎng)豬、養(yǎng)魚、沼氣工程、養(yǎng)鴨、種植農(nóng)作物、養(yǎng)蘑菇、種桑養(yǎng)蠶、種植果樹等多個生產(chǎn)過程合理地有機結合起來，成為一種高效良性的循環(huán)，生態(tài)效益達到了良性發(fā)展。請就此生態(tài)農(nóng)場的特點，完成下列問題：
(1)該生態(tài)農(nóng)場充分體現(xiàn)了生態(tài)工程基本原理中的____________、____________和____________。

(2)該系統(tǒng)工程的核心之一是沼氣池，沼氣的制作如圖所示，如果將“無機物→農(nóng)田”這一環(huán)節(jié)去掉，對生態(tài)農(nóng)業(yè)系統(tǒng)有何影響？________________________________________________________________________。

(3)在該生態(tài)農(nóng)場中存在如圖所示的物質循環(huán)過程，據(jù)圖分析不符合生態(tài)工程原理的敘述是(　　)

A．物質經(jīng)過多級利用，實現(xiàn)了良性循環(huán)
B．每一級生產(chǎn)環(huán)節(jié)都獲得產(chǎn)品，提高了生態(tài)經(jīng)濟效益
C．由于食物鏈延長，能量逐級損耗，系統(tǒng)總能量利用率降低
D．由于各級產(chǎn)物都可以利用，減少了廢物和污染

2．(1)物質循環(huán)再生原理　物種多樣性原理　整體性原理
協(xié)調與平衡原理　系統(tǒng)學和工程學原理(任答三個即可)
(2)土壤中的無機物得不到補充，物質循環(huán)受到破壞，土壤肥力下降
(3)C
[解析] (1)生態(tài)工程中的生態(tài)農(nóng)業(yè)是建立在物質循環(huán)再生、物種多樣性和整體性等原理基礎上的，在實現(xiàn)經(jīng)濟效益的同時，也取得了良好的生態(tài)效益和社會效益。(2)物質循環(huán)的特點是循環(huán)往復、分層分級利用，從而達到取之不盡、用之不竭的目的，即物質循環(huán)再生原理。如果把 “無機物→農(nóng)田”這一環(huán)節(jié)去掉，勢必會造成物質循環(huán)受到破壞，土壤無機物得不到及時補充，土壤肥力會下降。(3)能量沿著食物鏈流動時，能量逐級遞減，傳遞大約為10%～20%，因此最高營養(yǎng)級獲得的總能量最低。但系統(tǒng)的總能量包括每個生產(chǎn)環(huán)節(jié)上輸出的產(chǎn)品能量，顯然這個系統(tǒng)總能量利用率與單種作物的系統(tǒng)總能量利用率相比大大增加。
3．[2012•西安一模]如圖為細胞融合的簡略過程，請據(jù)圖回答：


(1)若A、B是動物細胞，通常用________處理獲得分散的單個細胞。A、B到C的過程中，動物細胞融合常用的誘導方法是____________。

(2)若該圖是生產(chǎn)抗甲型流感病毒的單克隆抗體的制備過程。 A為從小鼠體內獲取的______，在獲得此細胞之前，小鼠需注射__________，圖中B細胞是小鼠骨髓瘤細胞，符合要求的D細胞具有的特點是____________________________。
(3)若A、B是植物細胞，則之前已用____________去除了細胞壁。常用來誘導細胞融合的化學試劑是__________。
(4)若A是番茄原生質體，B為馬鈴薯原生質體， D要再生出________。通過植物組織培養(yǎng)技術把D培養(yǎng)成雜種植株，D個體____________(填“可育”或“不育”)。這種育種方式的優(yōu)點是_________________________________________________。利用上圖原理育種者還可以進行____________育種。
(5)若A、B分別是優(yōu)良奶牛的精子和卵細胞進行體外受精，一般要把B培養(yǎng)到________________________期。若要通過A、B獲得多個遺傳物質相同的且能產(chǎn)奶的個體，實際操作中用到的技術有______________________________________(至少寫四種)。
3．(1)胰蛋白酶　滅活的病毒
(2)漿細胞　滅活甲流病毒　既能分泌抗甲流病毒抗體又能無限增殖
(3)纖維素酶、果膠酶(酶解法)　聚乙二醇
(4)細胞壁　可育　按照人們的意愿改變了生物的遺傳物質，克服了遠緣雜交不親和的障礙　多倍體
(5)次級卵母細胞減數(shù)第二次分裂中　體外受精技術、早期胚胎培養(yǎng)技術、性別鑒定、胚胎分割、胚胎移植技術等
[解析] 動物細胞培養(yǎng)的過程是：先制備培養(yǎng)液，然后取胚胎或幼齡動物的器官或組織細胞，用胰蛋白酶等處理使組織分散成單個細胞，將單個細胞配制成一定濃度的細胞懸浮液，再將懸浮液放入培養(yǎng)瓶中在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。動物細胞融合和植物體細胞雜交這兩項細胞工程技術中，都包含有細胞融合的過程。對于誘導方法來說，除動物細胞的融合還常用滅活的病毒做誘導劑外，其他是基本相同的。不同的是：①植物細胞融合前要用酶解法去掉細胞壁；②動物細胞融合除物理法、化學法外，還用到生物方法，即滅活的病毒；③培養(yǎng)基成分不同，動物細胞培養(yǎng)是用液體培養(yǎng)基，其成分中有動物血清；④培養(yǎng)目的和結果等方面也有區(qū)別，如植物體細胞雜交可獲得雜種植株，這種育種方式可以按照人們的意愿改變生物的遺傳物質，克服了遠緣雜交不親和的障礙。由于馬鈴薯和番茄各自都是可育的，因此雜種植株D個體可進行正常的減數(shù)分裂，因此也是可育的。處于減數(shù)第二次分裂中期的次級卵母細胞，才具有與精子受精的能力。通過A、B獲得多個遺傳物質相同的且能產(chǎn)奶的個體，實際上就是通過胚胎工程培育試管牛的過程，外加對早期胚胎進行胚胎分割，這樣可以加快繁殖速度。
4．[2012•濰坊一模]科學家發(fā)現(xiàn)家蠅體內存在一種抗菌活性蛋白，這種蛋白質具有極強的抗菌能力，受到研究者重視。分析回答：
(1)分離該抗菌蛋白可用電泳法，其原理是根據(jù)蛋白質分子的______、大小及形狀不同，在電場中的____________不同而實現(xiàn)分離。
(2)可用金黃色葡萄球菌來檢驗該蛋白的抗菌特性�？咕鷮嶒炛兴�用培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨主要為細菌生長提供________和________。
(3)分別在加入和未加入該抗菌蛋白的培養(yǎng)基中接種等量菌液。培養(yǎng)一定時間后，比較兩種培養(yǎng)基中菌落的__________，確定該蛋白質的抗菌效果。
(4)細菌培養(yǎng)常用的接種方法有__________和____________。實驗結束后，對使用過的培養(yǎng)基應進行________處理。
4．(1)電荷(帶電情況)　遷移速度
(2)碳源　氮源　(3)數(shù)量
(4)平板劃線法　稀釋涂布平板法(稀釋混合平板法)　滅菌
[解析] (1)有關物質的分離與提取方法，涉及分離蛋白質的凝膠色譜法和電泳法，電泳法——利用了待分離樣品中各種不同蛋白質的分子帶電性質的差異以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。(2)用于培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中，一般要含有微生物生長所需要的碳源、氮源、水和無機鹽等成分，碳源、氮源一般分別由糖類和蛋白質所提供。(3)將抗菌蛋白加入金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基后，可根據(jù)菌落多少來判斷其抗菌效果。(4)有關微生物的接種和培養(yǎng)方法，常用平板劃線法和稀釋涂布平板法對細菌進行接種。
5．[2012•西安一模]某年我國某地由于柑橘大實蠅的危害，橘農(nóng)遭受到了很大的損失，當?shù)卣�府想盡一切辦法幫助橘農(nóng)盡量減少損失。
(1)有人想提取橘皮精油獲取利潤，一般提取橘皮精油的方法是______法，用這種方法提取橘皮精油的主要步驟是：石灰水浸泡、漂洗、________、________、靜置、________。
(2)橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時會發(fā)生________，使用水中蒸餾法又會產(chǎn)生原料________的問題。
(3)在提取橘皮精油時，橘皮在石灰水中的浸泡時間為______以上，并且橘皮要浸透，這樣最后才會得到高的出油率。
(4)從橘皮中提取的橘皮精油的特點是_______________________，具有誘人的橘香味。
(5)某橘農(nóng)發(fā)現(xiàn)自家有一株橘樹具有抗蟲性狀，欲利用組織培養(yǎng)技術大量繁殖，組織培養(yǎng)的選材非常關鍵，植物材料的選擇直接關系到實驗的成敗。若用花藥進行離體培養(yǎng)則應選擇花粉發(fā)育至__________期的花藥培養(yǎng)成功率最高。確定花粉發(fā)育時期最常用的方法有__________法，某些植物的花粉不易著色，需采用__________法。

(6)影響植物組織培養(yǎng)的因素很多，其中最關鍵的激素有__________和__________。
5．(1)壓榨　壓榨　過濾　再次過濾
(2)部分水解　焦糊　(3)10 h　(4)無色透明
(5)單核　醋酸洋紅　焙花青­鉻礬
(6)生長素　細胞分裂素(兩空順序可以顛倒)
[解析] (1)橘皮精油的提取：石灰水浸泡→漂洗→壓榨→過濾→靜置→再次過濾→橘皮油。(2)橘皮精油的主要成分是檸檬烯，其有效成分在用水蒸氣蒸餾法提取時容易發(fā)生部分水解，使用水中蒸餾法提取時原料容易焦糊，所以一般采用壓榨法提取橘皮精油。(3)用7%～8%石灰水浸泡橘10 h以上，目的是防止壓榨時滑脫，提高出油率，降低壓榨液的黏稠度，過濾時不堵塞篩眼。(4)橘皮精油無色透明。(5)花粉發(fā)育的過程中，只有某一個時期對離體刺激敏感。一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側的時期，花藥培養(yǎng)成功率最高。選擇花藥時，一般要通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。確定花粉發(fā)育時期的最常用的方法有醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用焙花青一鉻釩法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。(6)在植物組織培養(yǎng)過程中，當生長素濃度＜細胞分裂素濃度時，有利于芽的形成；當生長素濃度＞細胞分裂素濃度時，有利于根的形成。所以花藥脫分化產(chǎn)生胚狀體還是愈傷組織主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。



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