動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：

1、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的成分：葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素等。
3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的特點(diǎn)：液體培養(yǎng)基含動(dòng)物血清。
4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件
(1)充足的營(yíng)養(yǎng)供給??微量元素、無機(jī)鹽、糖類、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、血清等。
(2)適宜的溫度：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。
(3)無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。
(4)氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂。O₂是細(xì)胞代謝所必需的，CO₂的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。
5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：
取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。





植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：

項(xiàng)目		植物組織培養(yǎng)	動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)
理論基礎(chǔ)		植物細(xì)胞的全能性	細(xì)胞增殖
培養(yǎng)基	類型	（半）固體培養(yǎng)基	液體培養(yǎng)基
	成分	水、礦質(zhì)元素、維生素、蔗糖、氨基酸、瓊脂	葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、促生長(zhǎng)因子、動(dòng)物血清等
取材		植物幼嫩部位或花藥等	動(dòng)物胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織
過程
結(jié)果		新的組織或植株個(gè)體，可以體現(xiàn)全能性	新的細(xì)胞系或細(xì)胞株，不形成個(gè)體，不體現(xiàn)全能性
應(yīng)用		①植株快速繁殖 ②脫毒植株的培育 ③人工種子 ④生產(chǎn)藥物、殺蟲劑等 ⑤轉(zhuǎn)基因植物的培育	①蛋白質(zhì)坐物制品的生產(chǎn) ②皮膚移植材料的培育 ③檢測(cè)有毒物質(zhì) ④生理、病理、藥理學(xué)研究
相同點(diǎn)		①兩技術(shù)手段培養(yǎng)過程中都進(jìn)行有絲分裂，都是無性繁殖，都可稱克隆，都不涉及減數(shù)分裂 ②均需無菌操作，需要適宜的溫度、pH等條件

知識(shí)點(diǎn)撥：

1、細(xì)胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互抑制時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用：制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測(cè)有毒物質(zhì)、培養(yǎng)醫(yī)學(xué)研究的各種細(xì)胞。
3、細(xì)胞株傳至50代后，不能再傳下去，但有部分存活的細(xì)胞一般能夠傳到40～50代，這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。
4、細(xì)胞株細(xì)胞的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變。當(dāng)細(xì)胞株傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”，不能再傳下去。但是有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，而且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，有可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞成為細(xì)胞系。

知識(shí)拓展：

1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用
(1)生產(chǎn)病毒疫苗、單克隆抗體、干擾素等。
(2)利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中的細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制的特點(diǎn)，可用燒傷病人自己的健康皮膚細(xì)胞培養(yǎng)出大量的自身薄層皮膚細(xì)胞，以供植皮所需。
(3)培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性。
2、用胰蛋白酶處理組織塊，可使細(xì)胞分散開，這樣做的目的是使細(xì)胞與組織液充分接觸，這也說明了細(xì)胞間的主要物質(zhì)是蛋白質(zhì)。
3、當(dāng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)超過50代后，少數(shù)細(xì)胞發(fā)生突變而持續(xù)分裂成為癌變細(xì)胞。癌細(xì)胞失去了接觸抑制，可以在培養(yǎng)瓶中形成多層細(xì)胞。
4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基成分特有的動(dòng)物血清含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等多種成分．
5、植物組織培養(yǎng)最終產(chǎn)生新個(gè)體，體現(xiàn)全能性；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生大量細(xì)胞，不形成新個(gè)體，故不能體現(xiàn)全能性。

相關(guān)高中生物知識(shí)點(diǎn)：科學(xué)研究方法

科學(xué)研究方法：

1、假說??演繹法
①提出假設(shè)
②演繹就是推理
③實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證假設(shè)和推理
④得出結(jié)論
2、同位素示蹤法：同位素示蹤法是利用放射性核素或稀有穩(wěn)定核素作為示蹤劑對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行標(biāo)記的微量分析方法
3、科學(xué)的研究方法包括：歸納法、類比推理法、實(shí)驗(yàn)法和演繹法。
①歸納法：是從個(gè)別性知識(shí)，引出一般性知識(shí)的推理，是由已知真的前提，引出可能真的結(jié)論。它把特性或關(guān)系歸結(jié)到基于對(duì)特殊的代表（token）的有限觀察的類型；或公式表達(dá)基于對(duì)反復(fù)再現(xiàn)的現(xiàn)象的模式（pattern）的有限觀察的規(guī)律。
②類比推理法：類比推理這是科學(xué)研究中常用的方法之一。類比推理是根據(jù)兩個(gè)或兩類對(duì)象有部分屬性相同，從而推出它們的其他屬性也相同的推理。簡(jiǎn)稱類推、類比。它是以關(guān)于兩個(gè)事物某些屬性相同的判斷為前提，推出兩個(gè)事物的其他屬性相同的結(jié)論的推理。
③實(shí)驗(yàn)法：通過試驗(yàn)的論證得出所需數(shù)據(jù)，進(jìn)行分析后得出結(jié)論。分為：化學(xué)物質(zhì)的檢測(cè)方法；實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯示方法；實(shí)驗(yàn)條件的控制方法；實(shí)驗(yàn)中控制溫度的方法
④演繹法：從普遍性結(jié)論或一般性事理推導(dǎo)出個(gè)別性結(jié)論的論證方法。演繹法得出的結(jié)論正確與否，有待于實(shí)踐檢驗(yàn)。它只能從邏輯上保證其結(jié)論的有效性，而不能從內(nèi)容上確保其結(jié)論的真理性。也可以從邏輯思維，逆向思維和想象思維延伸到其結(jié)論該以反證明。
4、實(shí)驗(yàn)必須遵守的原則：
①設(shè)置對(duì)照原則：空白對(duì)照；條件對(duì)照；相互對(duì)照；自身對(duì)照。
②單一變量原則；
③平行重復(fù)原則
5、實(shí)驗(yàn)的特性：對(duì)照，統(tǒng)一性質(zhì)。提出問題；設(shè)計(jì)方案；討論結(jié)果；分析問題。分為科學(xué)實(shí)驗(yàn)；驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)；對(duì)照實(shí)驗(yàn)等。

知識(shí)拓展：

1、生物學(xué)的歷史研究進(jìn)展和相關(guān)實(shí)驗(yàn)的敘述。
（1）孟德爾的假說??演繹法敘述
①提出假設(shè)（如孟德爾根據(jù)親本雜交實(shí)驗(yàn)，得到F₁，Aa這對(duì)基因是獨(dú)立的，在產(chǎn)生配子時(shí)相互分離。這里假設(shè)的是一對(duì)等位基因的情況）；
②演繹就是推理（如果這個(gè)假說是正確的，這樣F₁會(huì)產(chǎn)生兩種數(shù)量相等的配子，這樣測(cè)交后代應(yīng)該會(huì)產(chǎn)生兩種數(shù)量相等的類型）；
③最后實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證假設(shè)和推理（測(cè)交實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果確實(shí)產(chǎn)生了兩種數(shù)量相等的類型）；
④最后得出結(jié)論（就是分離定律）
（2）遺傳物質(zhì)驗(yàn)證的三個(gè)實(shí)驗(yàn)：肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)；噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)；煙草花葉病毒的重組實(shí)驗(yàn)
（3）酶發(fā)現(xiàn)過程中的實(shí)驗(yàn)：
①1777年，蘇格蘭醫(yī)生史蒂文斯從胃里分離一種液體（胃液），并證明了食物的分解過程可以在體外進(jìn)行。
②1834年，德國(guó)博物學(xué)家施旺把氯化汞加到胃液里，沉淀出一種白色粉末。除去粉末中的汞化合物，把剩下的粉末溶解，得到了一種濃度非常高的消化液，他把這粉末叫作“胃蛋白酶”（希臘語(yǔ)中的消化之意）。同時(shí)，兩位法國(guó)化學(xué)家帕揚(yáng)和佩索菲發(fā)現(xiàn)，麥芽提取物中有一種物質(zhì)，能使淀粉變成糖，變化的速度超過了酸的作用，他們稱這種物質(zhì)為“淀粉酶制劑”（希臘語(yǔ)的“分離”）。科學(xué)家們把酵母細(xì)胞一類的活動(dòng)體酵素和像胃蛋白酶一類的非活體酵素作了明確的區(qū)分。
③1878年，德國(guó)生理學(xué)家?guī)於魈岢霭押笳呓凶鳌懊浮薄?BR>④1897年，德國(guó)化學(xué)家畢希納用砂粒研磨酵細(xì)胞，把所有的細(xì)胞全部研碎，并成功地提取出一種液體。他發(fā)現(xiàn)，這種液體依然能夠像酵母細(xì)胞一樣完成發(fā)酵任務(wù)。這個(gè)實(shí)驗(yàn)證明了活體酵素與非活體酵素的功能是一樣的。因此，“酶”這個(gè)詞現(xiàn)在適用于所有的酵素，而且是使生化反應(yīng)的催化劑。由于這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)，畢希納獲得了1907年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)
（4）生長(zhǎng)素的發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)：植物的向光生長(zhǎng)和胚芽鞘實(shí)驗(yàn)
2、同位素示蹤方法的應(yīng)用，使人們可以從分子水平動(dòng)態(tài)地觀察生物體內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)生理、生化過程，認(rèn)識(shí)生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。例如，用C、O等同位素研究光合作用，可以詳細(xì)地闡明葉綠素如何利用二氧化碳和水，什么是從這些簡(jiǎn)單分子形成糖類等大分子的中間物，以及影響每步生物合成反應(yīng)的條件等。
3、放射性同位素示蹤技術(shù)，是分子生物學(xué)研究中的重要手段之一，對(duì)蛋白質(zhì)生物合成的研究，從DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄到蛋白質(zhì)翻譯均起了很大的作用。最近鄰序列分析法應(yīng)用同位素示蹤技術(shù)結(jié)合酶切理論和統(tǒng)計(jì)學(xué)理論，研究證實(shí)了DNA分子中堿基排列規(guī)律，在體外作合成DNA的實(shí)驗(yàn)：分四批進(jìn)行，每批用一種不同的³²P標(biāo)記脫氧核苷三磷酸，³²P標(biāo)記在戊糖5'C的位置上，在完全條件下合成后，用特定的酶打開5'C－P鍵，使原堿基上通過戊糖5'C相連的³²P移到最鄰近的另一單核苷酸的3'C上。用最近鄰序列分析法首次提出了DNA復(fù)制與RNA轉(zhuǎn)錄的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，從而建立了分子雜交技術(shù)，例如以噬體T₂-DNA為模板制成[³²P]RNA，取一定量T₂-DNA和其它一些DNA加入此[³²P]RNA中，經(jīng)加熱使DNA雙鏈打開，并溫育，用密度梯度離心或微孔膜分離出DNA-[³²P]RNA復(fù)合體測(cè)其放射性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果只有菌體T₂的DNA能與該[³²P]RNA形成放射性復(fù)合體。從而證明了RNA與DNA模板的堿基呈特殊配對(duì)的互補(bǔ)關(guān)系，用分子雜交技術(shù)還證實(shí)了從RNA到DNA的逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象。
4、放射性同位素示蹤技術(shù)對(duì)分子生物學(xué)的貢獻(xiàn)還表現(xiàn)在：
a、對(duì)蛋白質(zhì)合成過程中三個(gè)連續(xù)階段，即肽鏈的起始、延伸和終止的研究；
b、核酸的分離和純化；
c、核酸末端核苷酸分析，序列測(cè)定；
d、核酸結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系；
e、RNA中的遺傳信息如何通過核苷酸的排列順序向蛋質(zhì)中氨基酸傳遞的研究等等。
為了更好地應(yīng)用放射性同位素示蹤技術(shù)，除了有賴于示蹤劑的高質(zhì)量和核探測(cè)器的高靈敏度外，關(guān)鍵還在于有科學(xué)根據(jù)的設(shè)想和創(chuàng)造性的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以及各種新技術(shù)的綜合應(yīng)用。


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