多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增DNA片段：

1、PCR原理：在解旋酶作用下，打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4中游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實際上就是在體外模擬細胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。
2、PCR反應(yīng)過程是：變性→復(fù)性→延伸

過程	說明	圖解
變性	當(dāng)溫度上升到90℃以上時，雙鏈DNA解聚為單鏈
復(fù)性	溫度下降到50℃左右，兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合
延伸	72℃左右時，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新鏈由5'端向3'端延伸

3、結(jié)果：上述三步反應(yīng)完成后，一個DNA分子就變成了兩個DNA分子，隨著重復(fù)次數(shù)的增多，DNA分子就以2ⁿ的形式增加。PCR的反應(yīng)過程都是在PCR擴增儀中完成的。



細胞被DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較：

		細胞內(nèi)DNA復(fù)制	體外DNA擴增（PCR）
不同點	解旋	在解旋酶作用下邊解旋邊復(fù)制	80～100℃高溫解旋，雙鏈完全分開
	酶	DNA解旋酶、DNA聚合酶	TaqDNA聚合酶
	引物	RNA	DNA、RNA
	溫度	體內(nèi)溫和條件	高溫
相同點		①需提供DNA模板 ②四種脫氧核苷酸為原料 ③子鏈延伸的方向都是從5'端到3'端

知識點撥：

1、DNA分子復(fù)制的人工控制
解開螺旋：在80～100℃時，DNA雙螺旋打開，形成兩條DNA單鏈，稱為變性。
恢復(fù)螺旋：在50～60℃左右時，兩條DNA單鏈重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱為復(fù)性。
復(fù)制條件：緩沖液，DNA模板、四種脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、兩種引物。
控制儀器：PCR儀（溫度周期性自動調(diào)節(jié)儀）。
2、PCR的含義是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。
3、PCR技術(shù)反應(yīng)的條件：①穩(wěn)定的緩沖溶液環(huán)境；②DNA模板；③合成引物；④四種脫氧核甘酸；⑤DNA聚合酶；⑥溫控設(shè)備
4、PCR技術(shù)最突出的優(yōu)點是快速、高效、靈活、易于操作。
5、TaqDNA聚合酶的特點是：耐高溫。

知識拓展：

1、DNA含量的測定??分光光度法

項目		說明
原理		DNA在260nm的紫外線波段有一強烈吸收峰，峰值大小與DNA的含量是正相關(guān)
過程	稀釋	2μLPCR反應(yīng)液，加入98μL蒸餾水，即將樣品進行50倍稀釋
	對照調(diào)零	以蒸餾水作為空白對照，在波長260nm處，將紫外分光光度計的賭注調(diào)節(jié)至零
	測量	取DNA稀釋液100μL至比色杯中，測定260nm處的光吸收值
	計算	DNA含量（μg/mL）=50×（260nm的讀數(shù)）×稀釋倍數(shù)

2、DNA聚合酶不恩能夠從頭合成DNA，只能從DNA的3'端開始延伸DNA鏈，因此DNA復(fù)制需要引物。

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